水稻单粒种子DNA的快速制备及PCR分析

以水稻单粒种子为材料,用NaOH溶液抽提DNA,用于PCR分析,结果表明:该方法提取的DNA可以扩增出水稻中的目的基因,并适用于SSR分析。该方法提取DNA速度快,成本低,适合大批量种子DNA的提取。     

溶藻弧菌感染对剑尾鱼HSP70基因表达的影响

用溶藻弧菌Vibrio alginolyticus感染剑尾鱼Xiphophorus helleri,取感染后第0、2、5、8、11 d的活鱼及感染后第2 d濒死鱼,采用半定量RT-PCR方法分别检测HSP70基因在肝胰脏、脾脏、头肾和心脏组织中的表达。结果表明:正常条件下,HSP70在检测的剑尾鱼组织中均不表达;在用溶藻弧菌感染第8 d的剑尾鱼肝胰脏内,HSP70基因被诱导强烈表达,HSP70/β-actin的值为1.80±0.03;在感染第2、5 d的剑尾鱼头肾内,HSP70基因被诱导表达,第8 d HSP70基因强烈表达,感染濒死鱼头肾内也检测到HSP70基因的强烈表达,HSP70/β-actin的值分别为0.35±0.02、0.15±0.01、2.00±0.06和0.95±0.05;在剑尾鱼被感染第2、5、8 d,在脾脏内均检测到HSP70基因的表达,感染濒死鱼脾脏内也检测到HSP70基因的强烈表达,HSP70/β-actin的值分别为0.30±0.02、0.15±0.01、0.45±0.03和1.55±0.04;仅在感染濒死鱼的心脏中检测到HSP70基因的表达,HSP70/β-actin的值为0.30±0.02;到第11 d HSP70基因表达消失。     

谷子f103基因的克隆及其特性分析

本文首次报道从谷子(Setaria italica)未成熟种子cDNA文库中克隆到一个新基因f103。序列分析表明．该基因由819个核苷酸组成，推测其编码的蛋白质有130个氨基酸，分子质量为14113u。Southern杂交结果显示f103基因以单拷贝存在于谷子基因组中，并且在玉米基因组中存在同源基因。Northern杂交表明f103基因在谷子茎、幼穗及未成熟种子中表达，在叶片组织中未检测到其表达活性。生物学软件分析结果显示，F103蛋白是亲水蛋白，定位于核内，肽链上有多个可以被磷酸化修饰的位点。这些特点可能是F103蛋白生理功能的结构基础。     

番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达

番木瓜环斑病毒（PRV）外壳蛋白（CP）基因cDNA克隆到pUC18上构型建成大肠杆菌（Escherichia coli)表达载体，Western blot检测结果表明该表达载体在E.clidDH5α中有两种特异蛋白表达，分子量为34kd的蛋白与推测的表达产物大小相符，且与PRVCP的一个“组分”大小相似；而分子量为16kd的蛋白可能是34kd蛋白的降解物或者是PRV CP基因不完全表达产物。     

与Mi相关的抗蚜基因的引物设计

通过NCBI等生物信息数据库搜索出与此抗蚜相关的Mi-1.1、Mi-1.2的基因组DNA序列[(Mi-1.1(CS025317 3768 bp,DNA和Mi-1.2(CS025319,3774bp,DNA)],采用Primer Premier生物信息学软件设计出Mi-1.1、Mi-1.2基因组DNA的PCR扩增引物,采用Oligo对引物进行分析,并得到:Mi-1.1的上下游引物分别是5'-AAATACTGTGGTTGCGTGAA-3'(Seq No:3347)和3'-GGGTGCTCGAAGTCTAGG-5'(Seq No:3736);Mi-1.2的上下游引物分别是5'-TAAAGTTGCGAGTGCTGT-3'(Seq No:2996)和3'-TGTTAGTAGGTCCCTCTT-5'(SeqNo:3462)。为抗蚜育种研究和PCR扩增提供条件。     

5种壁虎科动物Cyt b基因的序列分析

以红斑大壁虎、黑斑大壁虎、蹼趾壁虎和中国石龙子为材料,采用改进的SDS/蛋白酶K裂解法提取DNA,用特异引物进行PCR扩增线粒体Cyt b基因部分序列,PCR产物经纯化后,进行序列测序。用邻接法和最大简约法构建了其系统发育关系,结果显示红斑大壁虎和黑斑大壁虎首先聚在一起,再先后与同为壁虎属的蹼趾壁虎和白脊壁虎相聚,然后与同为壁虎科的沙虎相聚,最后与石龙子科的中国石龙子相聚。     

伪鹅观草高分子量麦谷蛋白基因启动子的克隆

通过PCR克隆的方法,从二倍体伪鹅观草St基因组中克隆到了高分子量麦谷蛋白亚基基因Glu-1St1的启动子,该序列全长959bp,序列比对及结构分析表明,它与麦类高分子量麦谷蛋白亚基基因的启动子序列的一致性很高,达到82%,包含有典型麦谷蛋白亚基基因启动子的顺式作用元件。系统进化分析表明,它与大麦的D-hordein基因启动子的进化关系比较近,属于典型的x型亚基基因的启动子。     

猪A组轮状病毒Vp4全基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR技术，从猪A组轮状病毒总RNA中扩增了2331bp的Vp4全基因，通过T-A克隆技术，将PCR产物克隆至克隆载体pCEM-T中，转化至受体菌株JM109中，通过质粒提取、限制性内切酶酶切、PCR、序列测定等方法鉴定，构建出重组阳性克隆质粒pCEM-T-Vp4。经DNASTAR软件分析核苷酸和氨基酸序列，结果显示该实验株与黑龙江株和美国株的同源性最高，均达到99％以上，并具有轮状病毒Vp4全基因的抗原表位区。     

中国砂梨7个自交不亲和新基因的分离与测序

S-RNase是配子体自交不亲和植物雌蕊的基因产物，它降解具有相同基因型的花粉mRNA或rRNA．导致植物的自交不亲和．借鉴日本梨S—RNase基因的分析方法．对中国砂梨5个品种的基因组DNA进行PCR—RFLP系统检测和DNA序列分析，从中发现了7个新的S—RNase等位基因，分别命名为S11-RNase、S12-RNase、S13-RNase、S14-RNase、S-15RNase、S16-RNase和S25-RNase基因，其部分序列已登录到GenBank．